سودومناس
بررسي ويژگيهاي باكتريهاي سودومناس فلورسنت جدا شده از
فيلوسفرمركبات جنوب ايران و ارزيابي توان آنتاگونيستي
آنها عليه باكتري عامل بيماري شانكر مركبات
تا كنون روشهاي متعددي براي شناسايي و رده بندي باكتريهاي بيماريزاي گياهي
به كار رفته از جمله بررسي ويژگيهاي فنوتيپي و آناليز اسيدهاي چرب ازروشهاي
مورد استفاده براي نيل به اين هدف بوده است.كاربرد روش آناليز اسيدهاي چرب
براي رده بندي و شناسايي باكتريها ابتدا توسط ابل و همكاران(1963) گزارش شد
كه تا كنون براي رده بندي و شناسايي باكتريهاي زيادي استفاده شده است .
بررسيهاي استيد (1992) نشان داد كه باكتريهاي جنس سودومناس از نظر الگوي
اسيدهاي چرب در شش گروه عمده قرار ميگيرد كه هر گروه خود داراي زير
گروه هايي است. بررسي 975 استرين از پاتو وارهاي مختلف گونه هاي
Xanthomonas توسط يانگ و همكاران نشان داده كه اين استرينها در سطح
گونه با روش آناليز اسيدهاي چرب قابل تفكيك مي باشند. در يك بررسي توسط
ولس و همكاران190استرين متعلق به شش جنس شامل Cytophaga&Erwinia
& Bacillus& Xanthomonas & Clostridium& Pseudomonusقابل
تفكيك و ارزيابي توان آنتاگونيستي استرينهاي سودومناس هاي فلورسنت جدا شده
از فيلوسفر مركبات بوده تا در برنامه مديريت كنترل بيماري شانكر باكتريايي
مركبات مورد استفاده قرار گيرند.
مواد و روش ها:
الف-نمونه برداري و جداسازي و بدست آوردن تك كلني از باكتريهاي آنتاگونيست:
اندامهاي سالم و آلوده مركبات از استانهاي كرمان(جيرفت و كهنوج)و هرمزگان (ميناب
و رودان )جمع آوري و پس از انتقال به آزمايشگاه به ازاي هر گرم بافت(برگ وشاخه
يا ميوه) يك ميلي ليتر آب مقطر استريل روي آنها ريخته شده. پس از گذشت يك تا دو
ساعت از هر نمونه دو تا سه لوپ در تشتكهاي حاوي محيط كشت Kings B كشت و
در دماي 25درجه سانتيگراد در انكوباتور گذاشته شدند. پس از گذشت سه روز از هر
هر تشتك تك كلني يا تك كلنيهايي كه ويژگيهاي تيپ Pseudomonasرا داشتند برگزيده
و دوباره روي محيط كشت هاي مزبور تا رسيدن به خلوص كامل كشت شدند.
ب-بررسي ويژگيهاي فنوتيپي باكتريهاي سودومناس فلورسنت جدا شده از
فيلوسفر مركبات
ج-بررسي اسيدهاي چرب باكتريهاي سودومناس فلورسنت جدا شده از فيلوسفر
مركبات
د.ارزيابي توان آنتاگونيستي باكتري هاي سودومناس فلورسنت جدا شده از
فيلوسفرمركبات عليه باكتري عامل باكتري بيماري شانكر مركبات در شرايط
آزمايشگاه:
براي بررسي تاثير باكتريهاي سودومناس فلورسنت در بازدارند گي از رشد باكتري
عامل بيماري شانكر مركبات در شرايط آزمايشگاه استرينهاي باكتري آنتاگونيست به
صورت لكه اي در تشتكهاي حاوي محيط Kings B در قالب يك طرح كاملا تصادفي در
سه تكرار كشت و پس از 48 ساعت نگهداري در دماي 25درجه سانتيگراد به صورت
زير مورد استفاده قرار گرفتند.براي تيمار شاهد به جاي باكتري آب مقطر استريل بر
روي محيط كشت قرار داده شد و در مراحل بعدي همانند ساير تيمارهاي آزمايش مورد
استفاده قرار گرفت.ابتدا كلنيهاي باكتريهاي آنتاگونيست كشت داده شده توسط پنبه استريل
آغشته به الكل از سطح تشتك پاك و سپس در قسمت در هر پتري دو قطره كلروفرم
اضافه و به صورت وارونه به مدت 20دقيقه نگهداري شدند . پس از آن در تشتكها در
شرايطا استريل باز و به مدت 30دقيقه هوادهي شدند و پس از آن يك ميلي ليتر از
سوسپانسيون باكتري بيماريزا در هر پتري توسط ميله شيشه اي پخش و در دماي 28
درجه سانتيگراد به مدت 72ساعت نگهداري شدند .قطر هاله باردارندگي هر تكرار
باكتري آنتاگونيست اندازه گيري شد و پس از ثبت در قالب طرح آماري به كار رفته
مورد تجزيه و تحليل قرار گرفته و ميانگين هاي آنها جهت انتخاب استرين هاي مختلف
از هر گروه آماري براي كاربرد در شرايط گلخانه مقايسه شد.